注意事項：

1,、注意無菌操作  MVE液氮罐

2,、細(xì)胞復(fù)蘇時融化凍存細(xì)胞速度要快，防止細(xì)胞損傷，細(xì)胞復(fù)蘇后的操作最好在適宜溫度中進行,，減少冷凍保護劑對細(xì)胞的毒性,。

3、為了避免復(fù)蘇過程中細(xì)胞液中有冰晶的出現(xiàn),，破壞細(xì)胞膜及細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu),。從液氮拿出來，要快速丟入37度水浴,，等細(xì)胞液剛剛化完取出,，加培養(yǎng)液稀釋。

4,、細(xì)胞放入水浴中注意用鑷子夾住細(xì)胞凍存管并在水浴中不時晃動,，使其受熱均勻，并防止水浴時水進入細(xì)胞凍存管污染細(xì)胞,。打開細(xì)胞凍存管之前要用酒精棉球?qū)龃婀芟静⒘栏伞?br />
5,、液氮一定的危險性，打開液氮罐取出細(xì)胞時,，要注意防凍，戴防凍手套,，防護眼睛,。

6、如果凍存管密封不嚴(yán),，液氮可被吸入,。由于解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，將可能發(fā)生爆炸,。復(fù)蘇過程中應(yīng)蓋上恒溫水浴鍋的蓋,。

細(xì)胞復(fù)蘇后貼壁細(xì)胞較少的原因：

1、凍存細(xì)胞時消化時間過長,，導(dǎo)致細(xì)胞復(fù)蘇時失去鐵壁能力,。

2、細(xì)胞凍存液的質(zhì)量不好也會導(dǎo)致細(xì)胞死亡,。

3,、凍存液的量加的太多也不好。

4,、凍存的時候把DMSO混均勻,，會有一些影響，但不會太大,。MVE液氮罐